目的の抗体をうまく作れたけれど当面の実験には十分すぎるほどの量で、これをどう保存したら良いか、これは贅沢な悩みかもしれません。モノクローナル抗体の場合は、抗体産生細胞を凍結保存して液体窒素下に保存すれば、必要なときに細胞を起こして抗体を得られます。
液体窒素での保存は、複数の保存庫にサンプルを分散させるなど最低限の危機管理をしておきます。クローン化した細胞から抗体の遺伝子を単離して保存すればなお良いでしょうが、軽鎖と重鎖のサブユニットをうまく発現させるシステムに遺伝子を載せるのはなかなか大変かもしれません。
ここでは、たんぱく質分子としての抗体をどう保存するかについて説明しましょう。ポリクローナル抗体を作ったときは、免疫した動物から末梢血を採取し、抗血清を分離・回収します。そして一部をアフィニティーカラムにかけて目的の抗体を単離します。
抗体の使用目的やアフィニティーカラムの大きさにもよりますが、この方法でかなりの量の抗体が精製できます。抗体を利用する実験が数ヶ月以内のものであるならば、冷蔵保存が良いです。
しかし、実験で抗体を希釈した場合は使い切ってしまうことを勧めます。一連の実験で使用する抗体量を見積もり、残りは凍結保存で構いません。-80℃など超低温槽が望ましいですが、凍結融解が絶対に起こらない-30℃程度のフリーザーでも大丈夫です。
精製した抗体の濃度が極端に低い(1μ グラム/mL 以下) ときは、濃縮するか血清アルブミンなどを添加して全たんぱく質濃度を高めておくのがよろしいです。
ただし、抗体の実験条件によっては他のたんぱく質を入れたくなかったりバッファーが限定されたりするので注意が必要です。一度アフィニティー精製した抗体は、このように冷蔵あるいは冷凍保存しますが、何れにしても近い将来に再度使用することが前提となります。
また、モノクローナル抗体でも精製した後はこの方法で保存することになりますが、凍結すると抗原と結合しなくなる抗体もあるので、予備実験は絶対に必要です。未精製の抗体、すなわち抗血清を保存する話に移ります。抗血清には通常10mグラム/mL 以上の IgG が含まれますが、目的の抗体はこの一部であることがアフィニティー精製することによりわかります。
もし、凍結乾燥機をお持ちならば、抗血清を凍結乾燥(フリーズドライ)するのが一番簡単です。大きめの凍結乾燥機で余裕を持って乾燥させると比較的綺麗なパウダーになります。無理をしたときは飴状になってしまい、長期保存には不安が残ります。凍結乾燥した抗血清は冷蔵デシケーターで保存します。すなわち、シリカゲルを周りに詰めた密閉容器に入れて冷蔵庫に置きます。冷凍保存と比較すると断然に安心感があります。乾燥ストックから抗血清を再生したいときは、湿気を吸わないように室温に戻してから必要量を秤量し、70m グラムに対して蒸留水1mL で溶かします。完全には溶けないので、0.45μm 等のフィルターを通してからアフィニティー精製などの実験に使います。この方法の最大のメリットは、万が一抗体が一部失活してもアフィニティー精製によって生きている抗体だけが得られることにあります。抗血清を直接凍結乾燥する代わりに硫酸アンモニウムなどで塩析して抗体を濃縮する方法もありますが、透析などの操作が必要なので、ここでは省略します。それから、冷凍庫に余裕があるならば、乾燥せずに凍結保存でも構いませんが、ストックが膨大な抗血清量になってから乾燥させるのは極めて大変です。
